وكثيراً ما يقوم زوار المسجد النبوي بزيارة الحجرة النبوية الشريفة، حيث يسلمون على النبي (صلى الله عليه وسلم) وصاحبيه أبي بكر وعمر (رضي الله عنهما).
تقع الحجرة النبوية، والمعروفة أيضًا بالبيت النبوي، في الجنوب الشرقي من المسجد النبوي. وقد كرَّم الله تعالى عائشة رضي الله عنها بوضع قبر النبي صلى الله عليه وسلم وصاحبيه أبي بكر الصديق وعمر بن الخطاب في غرفتها.
ومرض النبي صلى الله عليه وسلم وتوفي ودفن في حجرة عائشة. وروي أن النبي قال: «يدفن كل نبي حيث مات». ثم دُفن هناك أيضاً صاحباه أبو بكر وعمر رضي الله عنهما.
يوجد فوق الحجرة قبة خضراء مميزة شيدت عام 1253هـ، وهي تشير إلى الغرفة التي دفن فيها النبي وأصحابه. أصبحت هذه القبة الخضراء الشهيرة رمزًا للمسجد النبوي ومعلمًا مهمًا للزوار والحجاج.